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      斑貼試驗的規范步驟技巧學習一下

      更新時間:2023-03-28瀏覽:368次

        斑貼試驗是一種常用的實驗方法,主要用于鑒定細菌的血清學分類和鑒別。在斑貼試驗中,通過將一種特定的血清涂在細菌表面上,觀察細菌與血清反應的情況,來推測細菌的種類和特性。本文將詳細介紹其步驟。
       
        一、實驗器材
       
        首先需要準備的是實驗器材。主要有以下幾種:
       
        1.試管:用于懸浮細菌。
       
        2.離心管:用于進行離心。
       
        3.離心機:用于離心。
       
        4.滴定針:用于取樣。
       
        5.試驗板:用于固定細菌。
       
        6.無毒性普魯士藍鹽酸鹽:用于檢測斑點。
       
        7.脫氧膽酸:可使細菌細胞壁破裂,釋放抗原。
       
        8.磷緩沖液:用于稀釋抗原和血清。
       
        9.乳化器:用于使血清與抗原混合。
       
        10.洗滌緩沖液:用于清洗試驗板。
       
        11.組織塊刀:用于切取細菌。
       
        二、實驗步驟
       
        1.準備工作
       
        a.準備細菌液:用熒光顯微鏡檢測活菌及其腫脹度,將細菌懸浮在磷緩沖液中,搖勻后離心,取上清液。
       
        b.制備抗原液:將細菌取上清液和脫氧膽酸混合,振蕩。
       
        c.制備血清液:從鑒定正常動物、正常人或鑒定過該種病菌的患者的全血中,經離心制成的腫脹度合適的血清。
       
        注:處理時注意消毒,防止污染。
       
        2.制備孔板
       
        取一張孔板,加入一個滴定單位(約30微升)的抗原液到每個孔中,等孔板干燥好。
       
        3.孔板實驗
       
        a.采用或制備的抗血清,加入各個孔中,干燥后在37℃溫箱中孵育。
       
        b.在隔夜培養的試驗菌中,PDA或NA培養基上切取一枚直徑約2毫米細菌菌落,用滴定針在孔中放入一滴解膠體滴定溶液,壓在菌落上壓一下。
       
        c.將孔板保持在水平面上,用細胞培養箱中備好的恒溫環境下,孵育24小時。
       
        d.將孔板用無毒性普魯士藍鹽酸鹽染色,觀察每個孔的反應情況。
       
        4.結果判定
       
        反應陰性的孔,一個小的斑貼點也沒有,可認定此菌株不與該抗血清反應。
       
        反應陽性的孔,有一個小的斑貼點出現,應當作為深入研究的對象。
       
        總之,斑貼試驗是一種非常重要的實驗方法,可用于確定細菌種類和特性,從而指導臨床治療和疾病控制。實驗步驟簡單,但是需要注意消毒衛生和實驗器材的準備工作,以獲得準確、可靠的實驗結果。

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